基于微流控芯片的单细胞RNA测序技术
束璐茜,张炎(昆明理工大学理学院)
摘要:细胞异质性是理解胚胎发育、疾病演化等生命过程的关键,而传统群体细胞RNA测序无法解析单细胞层面的基因表达差异。单细胞RNA测序技术(scRNA-seq)虽能在单细胞分辨率下构建转录组图谱,但其面临单细胞分离捕获效率低、RNA微量操作偏差大等挑战。以微流控芯片为技术载体的scRNA⁃seq通过微米级流体操控系统,将单细胞分离、裂解、逆转录、扩增及测序文库构建等流程集成化,实现了高通量、低样本损耗及自动化操作,显著提升了scRNA⁃seq的效率与数据可靠性。本文概述了scRNA⁃seq的测序流程,包括单细胞的分离与捕获、RNA提取、逆转录与扩增、单细胞测序等步骤,分析了微流控芯片在适配单细胞、精准控制反应体积和实现流程自动化等方面的核心优势,并简述了代表性平台Fluidigm C1、10X GenomicsChromium及BD Rhapsody的技术原理与特点。微流控芯片技术为scRNA⁃seq提供了高效、精准的技术平台,未来随着芯片设计的不断优化与多组学整合分析能力的提升,我们期待其在解析复杂生物系统、揭示疾病机制乃至推动精准医疗方面发挥更为深远的作用。
关键词:单细胞RNA测序;微流控芯片;Fluidigm C1;10X Genomics;BD Rhapsody
目录介绍
1 引言
2 单细胞RNA测序流程
2. 1 单细胞的分离与捕获
2. 2 RNA提取、逆转录与扩增
2. 2. 1 RNA提取
2. 2. 2 逆转录
2. 2. 3 扩增
2. 3 单细胞测序
3 基于微流控芯片的单细胞RNA测序技术
3. 1 基于微流控芯片的scRNA-seq发展历程
3. 2 微流控芯片在scRNA-seq中的的核心优势
3. 2. 1 适配单细胞
3. 2. 2 反应体积精准控制
3. 2. 3 流程自动化
4 代表性的微流控单细胞RNA测序平台
4. 1 Fluidigm C1平台
4. 2 10X Genomics Chromium平台
4. 3 BD Rhapsody平台
5 结论与展望
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